生化危機4的故事發生在浣熊市事件六年後,美國政府調查並隨後關閉了安布雷拉公司。故事跟隨里昂·S·甘迺迪,一位從菜鳥警察轉變為美國特工的主角,他被賦予一項關鍵任務:營救總統的女兒艾希莉·葛蘭姆,她被一個神秘的邪教組織「光明會」綁架到了一個偏遠的歐洲村莊。遊戲以其創新的第三人稱視角和寬螢幕電影式畫面革新了系列作品,配備直覺式瞄準系統,可以實現精確的位置傷害。玩家可以策略性地瞄準敵人的特定身體部位以產生不同效果,而情境感應控制則能讓複雜動作的執行更加流暢。遊戲還引入了全面的武器升級系統,玩家可以使用從被擊敗的敵人身上獲得的遊戲幣和典當的珠寶,通過神秘的「軍火商人」來強化他們的武器庫,以確保在面對越來越具挑戰性的威脅時能夠生存下去。